日韩一级在线播放免费观看-日韩一级特黄-日韩一级视频在线观看播放-日韩一级视频免费观看-俄罗斯a级片-俄罗斯aa毛片一级

設為主頁 加入收藏 聯系我們

公司公告

更多公告>>
公司動態
當前位置:首頁 > 公司動態 > 造血干細胞培養基的培養步驟及注意事項
造血干細胞培養基的培養步驟及注意事項
點擊次數:1681 更新時間:2014-03-28
造血干細胞培養基的培養步驟
1、胚胎成纖維細胞的復蘇:胚胎干細胞一般是在37℃、5%CO2和95%濕度的培養條件下,生長在鋪有一層滋養細胞層的細胞培養皿或者是細胞培養瓶中(此處以細胞培養皿為例)。因此要先鋪滋養層細胞。在37℃水浴鍋里快速融化一管液氮凍存的小鼠胚胎成纖維細胞。把融化的細胞懸浮液加到裝有幾毫升預熱好的MEF培養基的無菌離心管中,輕輕混勻后,1000×g ,5min離心收集細胞。吸掉上清(除去凍存液中的DMSO),用10ml預熱的MEF培養基重懸細胞后,加到一個10cm的細胞培養皿中,放入37℃,含有5%CO2的加濕培養箱中培養。根據情況對細胞進行換液,大約4天左右,細胞就可以基本長滿整個培養皿,這時可以進行傳代、凍存或用于制備滋養細胞層。
2、滋養細胞層的制備:把長好的小鼠胚胎成纖維細胞的培養基吸掉,加入10ml新鮮的MEF培養基,并在避光的條件下加入110μl配好的絲裂霉素C,混勻后放入培養箱培養2h。把含有絲裂霉素C的培養基用無菌的15ml離心管收集起來避光保存,在一周之內可再次使用(直接使用該培養基處理細胞5h)。用PBS(不含二價離子)洗滌細胞2到3次后,用1ml含有EDTA的胰酶消化細胞,37℃培養箱放置約3min,直到細胞懸浮起來。用1ml MEF培養基中和胰酶的作用,之后把細胞收集到離心管里,1000×g離心5min。去掉上清,用1ml MEF培養基重懸細胞,之后把細胞平均分到兩個經過0.1%明膠處理過的細胞培養皿
中,用MEF培養基培養細胞。(明膠處理:加5ml 0.1%的明膠到細胞培養皿中,在37℃培養箱中至少放置10min,之后把明膠吸掉即可)。一般處理好的小鼠胚胎成纖維細胞在1~2h之后即可以貼壁,形成滋養細胞層,這時的滋養細胞層即可
用來培養小鼠胚胎干細胞。制備好的滋養細胞層可以在MEF培養基中保持1周左右的時間,或者是把細胞凍存。
3、小鼠胚胎干細胞(mouse embryonic stem cells,ES cells)的復蘇
4、小鼠胚胎干細胞的傳代
5、小鼠胚胎干細胞的凍存
造血干細胞培養基的培養注意事項:
1、絲裂霉素C在操作時要避光,避免其分解。
2、ES細胞傾向于聚集生長,因此在復蘇時,要選擇好培養皿的規格
3、ES細胞不能長的太滿,應避免使各個克隆之間接觸,以免發上分化。
4、為避免水或血清帶來的污染,對血清應進行支原體檢測,配好的培養基要進行污染測試。
座機:
023-63419609
聯系方式:
15021010459
點擊這里給我發消息
 

化工儀器網

推薦收藏該企業網站
主站蜘蛛池模板: 特级淫片欧美高清视频蜜桃| 性做久久久久久久免费观看 | 精品一区二区免费视频蜜桃网| 高H辣肉办公室| 村上里沙快播| 曰皮全部过程免费视频| 香蕉国产在线| 午夜国产| 亚洲成年人在线| 亚洲狠狠| 亚洲精品国产拍拍拍拍拍| 亚欧一区| 亚洲精品在线观看视频| 色青青草原桃花久久综合| 影音先锋2020色资源网| 在线免费黄| 天天操天天曰| 人人揉人人爽五月天视频| 片子免费在线观看| 全黄一级裸片视频免费| 日本理论视频| 色迷迷网免费站视频在线观看| 青青青国产精品视频| 亚洲国产在线精品国自产拍五月| 亚洲AV美女成人网站P站| 青青在线视版在线播放| 久久无码av三级| 国产亚洲精品久久久久久国 | 人人网碰人人网超| 日韩福利视频高清免费看| 久久精品热播在线看| 精品免费视在线视频观看| 国产99精品视频| 国产欧美一区二区三区久久| 含羞草在线免费观看| 国产成人精品自线拍| 国产乱码二卡3卡四卡| 被公疯狂玩弄的漂亮人妻| 国产成人无码精品久久久免费69| 国产亚洲AV无码成人网站| 久久偷拍vs国产在线播放|